携带博来霉素抗性筛选标记的多位点基因打靶载体构建  

作　　者：严爱芬[1] 罗婷婷[1,2] 杨倩桂 刘芳[1] 唐冬生[1] 

机构地区：[1]佛山科学技术学院,广东 佛山 528000 [2]暨南大学生命科学学院,广东广州 510632

出　　处：《中文科技期刊数据库(引文版)医药卫生》2016年第3期00258-00259,261,共3页

摘　　要：构建携带新霉素抗性筛选标记的人类多位点基因打靶载体。方法:本研究利用高保真酶对sv40 promoter-zeocin ORF-sv40 polyA进行PCR扩增,以构建好的含有左右同源臂DS1和DS2的打靶载体pUC-DS1-DS2为骨架载体(靶向人核糖体基因)。用Xba I对打靶载体进行单酶切并切胶回收线性载体,In-fusion重组酶系统对pUC-DS1-DS2和sv40 promoter-zeocin-sv40 polyA进行连接,构建携带有博来霉素筛选标记的人类多位点打靶载体。结果:PCR成功扩增出长度为1018 bp的sv40 promoter-zeocin-sv40 polyA,经过菌液PCR法、酶切及测序验证,结果显示,成功构人类多位点基因打靶载体pUC-DS1-sv40 promoter-zeocin-sv40 polyA -DS2。结论:成功构建携带博来霉素抗性筛选标记的人类多位点基因打靶载体,可用于插入需要敲低的基因,为将来创建基因敲低细胞模型工作奠定了基础。

关 键 词：同源重组克隆 基因打靶 多位点打靶载体 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]