猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究  

Study on Activity and Gene Expression of Phosphodiesterase in Porcine Neutrophils

作　　者：姜代勋[1] 陈武[2] 谷金妮[1] 许剑琴[1] 于同泉[3] 路苹[3] 穆祥[4] 

机构地区：[1]中国农业大学动物医学院,北京100094 [2]北京农学院动物科学技术系,北京102206 [3]农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206 [4]兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京102206

出　　处：《中国农业科学》2007年第6期1265-1270,共6页Scientia Agricultura Sinica

基　　金：国家自然科学基金项目(30671542);北京市科技新星项目(9558100500);北京市属市管高校人才强教计划资助项目

摘　　要：【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶(PDE)基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测,研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性,为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达,以高效液相色谱(HPLC)检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化,计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中,PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A共15个PDEmRNA在猪中性粒细胞表达,特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型;cAMP/cGMP-PDE在10～40μl范围内,与其活性存在良好的线性关系(r=0.9929/0.9992)。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型,其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型,PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系,可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。【Objective】The objective was to study the main types and activity of phosphodiesterase (PDE) existed in porcine neutrophils through the examination of PDE gene expression, activity and selective inhibitor experiments. They investigated the relationship between PDE distribution, activity change, adjustment on cAMP and cGMP content and neutrophils function.【Method】 PDE gene expression was detected by RT-PCR, and PDE activity was calculated by cyclic nucleotides content change examined with HPLC before and aft...

关 键 词：中性粒细胞 磷酸二酯酶 中国实验用小型猪 高效液相色谱 

分 类 号：S828[农业科学—畜牧学]