新基因ZNFD的克隆及其多克隆抗体的制备  

Cloning ZNFD gene and preparing polyclonal antibody

作　　者：史群芳[1] 杨世蕊[1] 雷陈[1] 孟祥勋[1] 黄超群[1] 王明华[1] 

机构地区：[1]苏州大学基础医学与生物科学学院,苏州215123

出　　处：《南通大学学报（医学版）》2008年第3期157-160,164,共5页Journal of Nantong University(Medical sciences)

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30700826);苏州大学医学发展基金资助项目

摘　　要：目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性。结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因。通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性。结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础。Objective:To clone ZNFD gene by PCR,construct expression vector ZNFD-pET32a,prepare and obtain its polyclonal antibody.Methods:The ORF fragment of ZNFD was amplified by PCR and sequenced.Part of ORF was cloned into pET32a prokaryotic expressing vector to form pET32a-ZNFD plasmid.His-ZNFD was expressed in E.coli Rosetta-gami(DE3) induced by IPTG and purified by using affinity chromatography.Purified His-ZNFD was used to immunize rabbits to prepare polyclonal antibody.Rabbit serum specificity and its titer we...

关 键 词：ZNFD基因 锌指 原核表达 免疫抗原 多克隆抗体 聚合酶链反应 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]