人GITR_(aa27-165)蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备  

Prokaryotic expression of human GITR_(aa27-165) and preparation of its polyclonal antibody

作　　者：仝佳[1] 王胜军[1] 陈君[1] 毛朝明[1] 杨云良[2] 杨敏[1] 胡正军[1] 只棣媛 许化溪[1] 

机构地区：[1]江苏大学医学技术学院免疫学与免疫检验学系,江苏镇江212013 [2]江苏大学附属医院眼科,江苏镇江212013 [3]江苏大学

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第3期243-246,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目(BK2004405);江苏大学高级人才基金资助项目(05JDG042)

摘　　要：目的:表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白,制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法:利用PCR从pGEMT-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过Profinity IMACNi-Charged Resin亲和层析柱进行纯化;纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果:构建了pQE30-hGITRaa27-165原核表达载体,原核蛋白hGI-TRaa27-165蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hGITRaa27-165蛋白,蛋白浓度为400mg/L,制备的抗hGITRaa27-165多抗效价高达1∶1.6×105,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论:获得高纯度hGITRaa27-165蛋白,并制备特异性pAb,将为进一步研究hGITR的生物学功能提供实验基础。AIM:To express and purify the extracellular region of human glucocorticoid-induced tumor necrosis factor(hGITR_(aa27-165)),and to prepare and identify the polyclonal antibody(pAb)against this fusion protein.METHODS:The 429 bp DNA sequence of hGITR_(aa27-165)was obtained from pGEM T-hGITR by PCR and then it was inserted into pQE30 plasmid to construct the prokaryotic expression plasmid pQE30-hGITR_(aa27-165).pQE30-hGITR_(aa27-165)was transformed into E.coli.The target fusion protein was expressed with the in...

关 键 词：hGITR 原核表达 多克隆抗体 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]