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作 者:刘安元[1] 陈琳[1] 万艳平[1] 陈熙[1] 朱翠明[1] 余敏君[1] 曹清香[1]
出 处:《现代免疫学》2008年第1期12-15,共4页Current Immunology
基 金:湖南省财政厅资助项目;湖南省教育厅资助项目(05C472);湖南省自然科学基金资助项目(06JJ4034)
摘 要:为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。To investigate the effect of over-expression of HCMV IE1-GFP fusion protein on IL-1β or TNF-α secretion and apoptosis of THP-1-macrophages,the eukaryotic expression vector pEGFP/IE1 was transfected into THP-1-macrophages. Forty-eight hour post-transfection,the expression and localization of GFP or GFP-IE1 was observed under the fluorescent microscope. The level of IL-1β or TNF-α in the cells media was examined by ELISA,and the mRNA expression of them was analyzed by RT-PCR. Cells undergoing apoptosis were d...
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