堆型艾美耳球虫单链抗体-PE40重组免疫毒素的构建  

Construction of ScFv-PE40 recombinant immunotoxin against Eimeria acervulina

作　　者：顾小龙[1] 秦建华[1] 赵月兰[2] 左玉柱[1] 康桂英[3] 包永占[1] 刘红彬[4] 

机构地区：[1]河北农业大学动物科技学院,河北保定071000 [2]河北农业大学中兽医学院,河北定洲073000 [3]内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古通辽028000 [4]河北北方学院动物科技学院,河北张家口075000

出　　处：《中国兽医学报》2008年第7期779-782,共4页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：河北省自然科学基金资助项目(303226)

摘　　要：用HindⅢ对已构建的质粒pT-PE40和原核表达载体pET22-ScFv进行单酶切,回收纯化1 101 bp的PE40基因片段并将其亚克隆至pET22-ScFv载体中,构建重组免疫毒素表达质粒pET22-ScFv-PE40。将该质粒转化入感受态大肠杆菌J M109中增殖,提取质粒后用SalⅠ和NotⅠ进行双酶切鉴定,得到了1 114 bp和6 181 bp目的基因片段。测序鉴定PE40的插入方向,选取以PE40基因5′端与ScFv基因3′端连接的重组质粒,构建了抗堆型艾美耳球虫重组免疫毒素质粒pET22-ScFv-PE40。抗堆型艾美耳球虫重组质粒pET22-ScFv-PE40经1 mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌中表达约68 000的目的蛋白。使用抗PE多克隆抗体对目的蛋白进行蛋白印迹分析,结果表达产物与抗PE多克隆抗体发生抗原抗体反应,证明融合基因得到表达。In order to construct a prokaryotic expression vector containing the ScFv gene against Eimeria acervulina and the gene PE40,the simple digestion(HindⅢ) was performed to deal with pT-PE40 and pET22-ScFv respectively,and then PE40 gene was subcloned into pET22-ScFv.The recombinant plasmid was identified by double digestion(Sal Ⅰ and Not Ⅰ)and sequenced.Two objective gene fragments with the length of 1 114 bp and 6 181 bp were obtained.The sequence analysis has proved the correctness of the recombinant immunot...

关 键 词：堆型艾美耳球虫 单链抗体 PE40 重组免疫毒素 

分 类 号：S852.5[农业科学—基础兽医学]