间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位  

Application of indirect immuno-fluorescent staining method for detection and antigen location of duck enteritis virus in paraffin sections

作　　者：程安春[1] 韩晓英[1] 朱德康[1] 汪铭书[1] 袁桂萍[1] 廖永洪[1] 徐超[1] 

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心

出　　处：《中国兽医学报》2008年第8期871-875,共5页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家自然科学基金项目(30771598);国家"十一五"科技支撑计划(2007Z06-017);教育部"新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-04-0906;NCET-06-0818);教育部高校科技创新工程重大项目培育资金(706050);四川省杰出青年学科带头人基金后续资助项目(05ZQ026-038);四川省基础研究项目(07JY029-016;07JY029-017);四川省重点建设学科项目(SZD0418)

摘　　要：差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒(DEV)免疫兔制备兔抗DEV高免血清后,用DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化的兔抗DEVIgG建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中DEV的方法。IFA的最佳条件为:石蜡切片用10mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复10min,胰酶修复20min;10%小牛血清室温封闭30min;加入1∶25的兔抗DEVIgG于4℃孵育过夜;再加入FITC标记的羊抗兔IgG于37℃孵育45min。以建立的IFA对DEV人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测,在死亡鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏中检测到DEV抗原。研究表明,IFA检测石蜡切片中的DEV具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的良好方法。The duck enteritis virus(DEV) was propagated by duck embryos,and then purified through differential centrifugation,sucrose discontinuous gradient ultracentrifugation method.Rabbits were immunized with the purified virus in complete Freund s adjuvant(CFA) to obtain DEV-specific antibodies,which were then purified through DEAE-SephadexA-50 columns.An indirect immuno-fluorescent staining method(IFA) was established to detect the DEV antigen in paraffin sections.The optimum conditions of this IFA were as follow...

关 键 词：间接免疫荧光 石蜡切片 鸭病毒性肠炎病毒 检测 抗原定位 

分 类 号：S854.43[农业科学—临床兽医学]