鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体的构建研究  

Construction of expression vector for mouse PS1-GFP

作　　者：李佳慧[1] 李铁[2] 桑建利[2] 

机构地区：[1]中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所,北京100021 [2]北京师范大学生命科学院细胞生物学研究所,北京100875

出　　处：《中国实验动物学报》2005年第S1期62-63,共2页Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica

摘　　要：Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融合蛋白中切下PS1基因,从pMD18-T-PS1质粒中切下载体部分,经过连接,获得中间载体,利用该重组载体中的EcoRI和SalI酶切位点,酶切连接入pEGFP-N2载体中,获得pEGFP-N2-PS1融合蛋白表达载体,经测序鉴定后备用。Mutations in presenilin 1(PS1) gene are genetically linked to the early onset of familial Alzhemer s disease (EOFAD). Full-length PS1 is a multiple tansmembrane protein which relates to γ-secretase and undergoes endoproteolytic processin of a quite number proteins , involving those proteins in Wnt/wingless signaling, cell adhesion, cell-cell interaction and cell fate determinaton during development.But the exact structure and functions of PS1 haven t been known. The expression vector for mouse PS1-GFP fusio...

关 键 词：PS1基因 绿色荧光蛋白 融合蛋白 小鼠 

分 类 号：Q95[生物学—动物学]