棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达  

Cloning,sequence analysis and prokaryotic expression of the ubiquitin gene of Haritalodes derogata (Fabricius) (Lepidoptera:Pyralidae)

作　　者：张宇宏[1] 林同[1] 张琪[1] 常润磊[1] 温秀军[1] 

机构地区：[1]华南农业大学林学院,广州510642

出　　处：《昆虫学报》2008年第9期910-915,共6页Acta Entomologica Sinica

基　　金：广东省自然科学基金项目(8151064201000068);华南农业大学经济林研究中心资助项目(4400-32990190);华南农业大学校长基金项目(4400-208012)

摘　　要：本研究用RT-PCR方法,克隆了棉卷叶野螟Haritalodes derogata(Fabricius)泛素基因编码区,GenBank登录号为 EU580145。序列分析表明,该编码区长228 bp,编码76个氨基酸,推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为 8.53 kD和5.83。同源性比较发现,棉卷叶野螟泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有93 %以上的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabricius)遗传距离较近,通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体 pET-32a-ub,经IPTG诱导,棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区,并经Western blotting分析证明实现了该基因的原核表达,为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。Ubiquitin plays a very important role in regulating non-lysosomal ATP-dependent protein degradation.The coding sequence of Haritalodes derogata(Fabricius)ubiquitin gene was cloned and determined(GenBank accession no.EU580145).The opening reading frame(ORF)is 228 bp in length,encoding 76 amino acids with the molecular weight of 8.53 kD and theoretical isoelectric point of 5.83.Multiple sequence alignment indicated that H.derogata ubiquitin shared more than 93% identity with those of other ten insect species ...

关 键 词：棉卷叶野螟 泛素 基因克隆 基因序列分析 原核表达 

分 类 号：Q96[生物学—昆虫学]