Survivin基因诱饵表达载体的构建和鉴定  

Construction and identification of bait expression vector of Survivin gene

作　　者：钟梁[1] 郝坡[1] 刘北忠[1] 王东生[1] 刘畅[1] 金丹婷[1] 王(羽中) 王春光[1] 

机构地区：[1]重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016

出　　处：《中国现代医学杂志》2008年第22期3254-3257,3261,共5页China Journal of Modern Medicine

基　　金：国家自然科学基金(No.30300449);国家中医药管理局(No:02-03ZP52)

摘　　要：目的构建Survivin基因诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础。方法从人K562细胞中提取总RNA作为模板,逆转录得到Survivin cDNA,通过特异引物扩增Survivin基因的ORF区,然后与诱饵表达载体pGBKT7连接,构建诱饵表达载体pGBKT7-Survivin,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-Survivin转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了Survivin基因的ORF区,并成功将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Westernblot分析证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了Survivin基因的ORF区的酵母诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础。【Objective】To construct the bait expression plasmid pGBKT7-Survivin of survivin gene,which lay the foundations for constructing yeast two-hybrid system so as to screen target proteins of survivin protein.【Meth-ods】Total mRNA was extracted from human K562 cells,and then survivin cDNA was obtained by reverse transcrip-tion reaction.The ORF region of survivin gene was amplified,and then was ligated with the bait expression vector pGBKT7,the bait expression plasmid pGBKT7-Survivin was constructed ultimately.The...

关 键 词：SURVIVIN基因 诱饵载体 诱饵蛋白 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]