小鼠精子Sp17与IL-5融合蛋白的构建、表达及其免疫原性鉴定  

Construction and expression of the fusion gene of sperm protein 17 and IL-5 of mouse

作　　者：张巧玉[1,2] 李晋涛[3] 李玉燕[2] 梁志清[2] 吴玉章[3] 倪兵[3] 史常旭[2] 

机构地区：[1]解放军总医院第二附属医院妇产科 [2]第三军医大学西南医院妇产科 [3]第三军医大学免疫研究所

出　　处：《免疫学杂志》2009年第2期173-176,共4页Immunological Journal

基　　金：国家自然科学基金(30000183)

摘　　要：目的构建和表达小鼠精子蛋白Sp17与白介素5(IL-5)融合蛋白,并对其进行纯化和免疫原性鉴定。方法采用PCR技术从质粒pGEM-1-IL-5中扩增IL-5基因片段,将其克隆至pET/Sp17原核表达载体中与Sp17基因融合,构建重组质粒pET/Sp17-IL-5,经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni2+-NTAAgarose纯化,SDS-PAGE检测、N端测序及Western blot;重组蛋白Sp17-IL-5免疫小鼠后ELISA检测小鼠血清特异性抗体。结果成功构建小鼠精子蛋白Sp17与IL-5融合蛋白的高效表达质粒pET/Sp17-IL-5,重组工程菌pET-28a(+)-Sp17-IL-5/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白相对分子量(Mr)约39000,纯化后蛋白纯度达91%,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体。结论Sp17-IL-5蛋白经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性,为新型Sp17避孕疫苗的研制奠定基础。Objective To construct and express the fusion gene of sperm protein 17(Sp17)and IL-5,and to analyzed the immunological characteristics of the fusion protein.Methods The IL-5 gene,amplified from the plasmid pGEM-1-IL-5 by PCR,was cloned into the plasmid pET/Sp17 and the fusion gene Sp17-IL-5 was constructed.Then Sp17-IL-5 recombinant protein was express in E.coli BL21(DE3)and analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.Antibodies against Sp17 were detected in the sera of mice immunized with recombinant protein...

关 键 词：精子蛋白17 白细胞介素5 基因融合 原核表达 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]