非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究  

Indirect ELISA Diagnostic Kit of African Swine Fever

作　　者：蒋正军[1] 马世东[2] 蔡丽娟[1] 单文鲁[2] 王树双[1] 尹燕博[1] 龚振华[1] 李葳[1] 宣华[3] 

机构地区：[1]农业部动物检疫所,266032 [2]新疆农业大学动物医学院,830000 [3]解放军军需大学,长春130000

出　　处：《中国预防兽医学报》2000年第S1期107-113,共7页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

摘　　要：用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体，在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测，证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原，对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法，可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成，达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中，至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果，与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。The highly antigenic major structural protein P72 of ASF virus was used as detecting antigen in indirect enzyme linked im- munosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASFV serum. The protein P72 was expressed in sf insect cells by baculovirus (Bacp72). In SDSPAGE the molecular weight was about 72kDa. The recombinant proteins expressed in sf cells showed distinct antigenic properties when analysed by ELISA.The best ELISA react system were decided. The best coating buffer was 1% PGT. The best serum di...

关 键 词：非洲猪瘟 P72蛋白 Bacp72 ELISA 

分 类 号：S85[农业科学—兽医学]