流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达  

Expression of Hemagglutinin of Avian Influenza Virus in Insect Cells

作　　者：刘明[1] 于康震[1] 张云[1] 孔宪刚[1] 徐宜为[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨150001

出　　处：《中国预防兽医学报》2000年第S1期177-,共1页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

摘　　要：应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子 ｐＵＣＨ５。然后将 ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体 ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ，筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后，在脂质体转染试剂介导下，ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒 ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－Ｂｌｕｅ ＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化，获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验结果表明 ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞，血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达，为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。Based on the sequence of haemagglutinin (HA) gene of influenza virus A/ Goose/ Guangdong /1 /96 (H5N1), a set of primers were designed and synthesized . The 5 ends of primers adding the sequence of restriction endonuclease BamHI. The complete coding region of HA gene was obtained from the viral genome RNA by RT-PCR. The amplified fragments were digested with BamHI and then cloned into the plasmid vector pUC19 cleaved with BamHI. The recombinant plasmids contain HA genes were designated as pUCH5 .The ...

关 键 词：流感病毒 血凝素基因 杆状病毒 表达 

分 类 号：S85[农业科学—兽医学]