猪囊尾蚴rTS-CC18蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析  

Prokaryotic Expression and Purification of Recombinant TS-CC18 Antigen from Cysticercus Cellulosae and Identification of Its Antigenicity

作　　者：张少华[1] 才学鹏[1] 贾万忠[1] 骆学农[1] 刘红霞[1] 赵松波[1] 景志忠[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州730046

出　　处：《中国自然医学杂志》2009年第3期161-164,共4页Chinese Journal of Natural Medicine

基　　金：国家科技支撑计划项目(NO.2007BAD40B03);国家863计划项目(NO.2006AA10A207)

摘　　要：目的制备猪带绦虫囊尾蚴rTS-CC18抗原并对其抗原性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法用PCR方法从重组质粒pGEM-TS-CC18中扩增TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。采用Ni-FF亲和层析方法提纯表达蛋白。Western blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性。结果Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性rTS-CC18蛋白,其相对分子质量约16×103。Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应;间接ELISA检测血清抗体结果表明:纯化的rTS-CC18蛋白与全囊虫抗原的相对特异性达100.0%,相对敏感性达84.0%,总符合率为94.3%。结论成功制备了猪囊尾蚴rTS-CC18抗原,其特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值。Objective To prepare the recombinant TS-CC18 antigen and to identify its antigenicity.Methods TS-CC18 encoding gene was amplified by PCR from pGEM-TS-CC18 recombinant plasmid and subcloned into the expression vector pET 30a.Then it was used to transform Escherichia coli BL21(DE3)cells to produce TS-CC18 recombinant antigen(rTS-CC18).The His-tagged expressed protein was purified by Ni-FF affinity chromatography.Western blot and ELISA were used to identify the antigencity of the recombinant protein.Results Tr...

关 键 词：猪囊尾蚴 rTS-CC18抗原 原核表达 纯化 抗原性 

分 类 号：S852.7[农业科学—基础兽医学]