β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用  

Application of Beta2-microglobulin-ZsGreen in binding affinity assay of MHC-Ⅰ peptide

作　　者：熊锐华[1,2] 王昊亮[1] 邹丽云[1] 李景怡[1,2] 张晋宇[1] 张荣华[2] 万瑛[1] 

机构地区：[1]第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所 [2]第三军医大学西南医院中医科

出　　处：《免疫学杂志》2009年第4期452-456,共5页Immunological Journal

基　　金：国家863计划(2006AA02Z416)

摘　　要：目的构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法。方法构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与T2细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位。结果构建了β2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定。结论β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定。Objective To establish a novel and convenient MHC-Ⅰ peptides binding affinity assay by using recombinant β2-microglobulin-ZsGreen fusion protein.Methods An eukaryotic expression vector was constructed by linking the sequence of theβ2-microglobulin and ZsGreen-6×His Tag employing molecular cloning technique.Theβ2-microglobulin-ZsGreen fusion protein was expressed in 293FTcells,and then purified with Ni-affinity chromatography.The fusion protein was co-cultured with T2 cell and positive MHC-Ⅰ binding epitopes...

关 键 词：绿色荧光蛋白 融合蛋白 亲和力标记物 T细胞表位 

分 类 号：R392.3[医药卫生—免疫学]