乙肝病毒蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件优化  

Optimizing the conditions for in vitro expansion of HBV protein epitope-specific CTLs

作　　者：郝友华[1] 陈玲[1] 杨新星[1] 丁红晖[1] 冯雪梅[1] 朱帆[1] 刘贽[1] 杨东亮[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室

出　　处：《免疫学杂志》2009年第4期413-417,共5页Immunological Journal

基　　金：国家自然科学基金(30400412);国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(2005CB522901)

摘　　要：目的优化乙肝蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件。方法选择急性自限性HBV感染者外周血,分离PBMC,体外用乙肝蛋白抗原表位多肽特异性刺激,特定天数后收集细胞,用CD8抗体与MHC-I类分子HBV抗原肽四聚体进行染色流式检测,检测扩增后乙肝蛋白抗原表位特异性CTL在CD8阳性细胞群中所占的频率。结果1)在不同多肽浓度刺激下,当浓度在20 ug/mL时,所测得特异性CTL占PBMC中CD8+T细胞的频率达到最高峰;2)固定刺激多肽浓度,在不同的刺激天数获得的特异性CTL频率第10天时最高;3)在不同的细胞因子培养条件中,当加入的细胞因子IL-2,IL-7,IL-15组合时所获得的特异性CTL频率最高。结论在刺激肽浓度为20μg/mL,并加入适量的细胞因子(IL-2,IL-7,IL-15),刺激10天的条件下,所获得的乙肝蛋白抗原特异性CTL频率最高。Objective To optimize the in vitro expansion conditions HBV protein epitope-specific CTL.Methods PBMC from the acute self-limited HBV patients was stimulated by peptide under the conditions of different concentrations,different stimulating intervals,and different cytokines.The cells were harvested and the frequencies of the HBV specific CTLs were obtain by FACS using FITC-marked CD8 antibody and HBV peptide-MHC-I molecular tetramers.Then the obtained frequencies of HBV specific CTLs in different culture con...

关 键 词：乙肝病毒蛋白 表位特异性CTL 体外扩增 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]