人脐血单个核细胞Hlx基因的克隆、表达及其融合蛋白的免疫原性分析  

Prokaryotic expression of human Hlx gene from the cord blood mononuclear cells and immunogenicity analyzing of its fusion protein

作　　者：戴晓莉[1] 王胜军[1] 苏兆亮[1] 彭素芳[1] 李雅贞[1] 薛渊[1] 何志强[1] 陈建国[1] 邵启祥[1] 黄新祥[1] 许化溪[1] 

机构地区：[1]江苏大学检验医学研究所免疫学研究室

出　　处：《免疫学杂志》2009年第6期625-628,共4页Immunological Journal

基　　金：国家自然科学基金(30710103093;30300169);江苏大学大学生科研立项(06A080)

摘　　要：目的克隆人Hlx基因全长编码区,利用载体pQE30在大肠埃希菌M15中原核表达人Hlx基因,对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法利用RT-PCR技术从人脐血单个核细胞中克隆出Hlx基因,构建重组表达质粒pQE30/Hlx,并于大肠埃希菌M15中表达,经Western blot判断,以可溶形式存在带6×His标签的融合蛋白,用Ni2+-MAC层析柱对其进行纯化;将纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果成功克隆人Hlx基因编码区全长,包含1467bp,编码488个氨基酸残基。获得人Hlx融合蛋白和多克隆抗体,ELISA和Western blot结果表明融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。结论成功构建了原核表达质粒pQE30/Hlx,经纯化获Hlx蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究人Hlx的生物学功能奠定了基础。Objective To clone and express human Hlx in M15 strain of E. coli using pQE30 vector for preparing polyclonal antibody against Hlx. Methods The open reading frame of full length Hlx gene was cloned from the mononuclear cells of human cord blood by RT-PCR. Recombinant expression plasmid pQE30/Hlx,obtained by transfecting Hlx into pQE30 vector,was expressed in E. coli M15. Western blotting was used to detect the expression of Hlx soluble fusion protein with 6×His tag. The protein was purified by Ni2+-MAC colu...

关 键 词：Hlx 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学]