沙门菌REP-PCR分子分型技术的优化及其在耐药菌株中的应用  

Optimization of the REP-PCR molecular classification method of Salmonella and its application in drug-resistant strains

作　　者：汪川[1] 余倩[1] 马丽雅[1] 张朝武[1] 裴晓方[1] 刘衡川[1] 

机构地区：[1]四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室,成都610041

出　　处：《卫生研究》2009年第6期736-739,共4页Journal of Hygiene Research

基　　金：四川大学华西公共卫生学院青年科学研究基金

摘　　要：目的优化沙门菌REP-PCR分子分型技术,并在沙门菌耐药菌株分型研究中应用,为构建沙门菌同源性追踪体系提供数据。方法以肠炎沙门菌510041基因组DNA为模板,根据参考文献确定REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列。对反应体系模板量、Mg2+浓度和引物浓度的优化,采用对优化项目设置梯度,其它条件不变的方法进行。以优化的REP-PCR法分析24株沙门菌流行耐药株REP-PCR指纹图谱。根据指纹图谱条带对菌株进行分型,并将分型结果与菌株耐药谱分型结果作比较。结果PCR反应体系DNA模板量100ng/25μl,Mg2+浓度2.0mmol/L,上下游引物浓度各0.4μmol/L时,指纹图谱条带最清晰、明亮;不同血清群和血清型沙门菌株间REP-PCR指纹图谱差异较大,可在0.5kb到2.5kb范围内出现2至6条条带;24株沙门菌流行耐药株用该法可分为15型,根据耐药谱可分为7型。结论建立了优化的沙门菌REP-PCR分子分型技术;REP-PCR指纹图谱分型比耐药谱分型更加敏感。Objective To optimize the reaction conditions of REP-PCR molecular classification method of Salmonella;primarily apply it in drug-resistant strains,and supply data to a system of Salmonella homology tracing.Methods Genomic DNA of Salmonella enteritidis 510041 was used as the template for PCR.Target sequences in 510041 genomic DNA were amplified with the primers designed according to the references.To optimize template concentration,Mg 2+ concentration,primers concentration of PCR,the factor to be optimized ...

关 键 词：沙门菌 REP-PCR 耐药谱 

分 类 号：R378[医药卫生—病原生物学]