双重PCR检测马铃薯晚疫病菌和青枯病菌方法的建立及应用  

Development and application of duplex PCR assay for detection of Phytophthora infestans and Ralstonia solanacearum

作　　者：陈庆河[1] 李本金[1] 兰成忠[1] 赵健[1] 邱荣洲[1] 翁启勇[1] 

机构地区：[1]福建省农业科学院植物保护研究所,福州350013

出　　处：《植物病理学报》2009年第6期578-583,共6页Acta Phytopathologica Sinica

基　　金：国家自然科学基金项目(30600401);福建省科技重点项目(2008N0029);福建省农业科学院科技创新团队建设基金(STIF-Y07);农业部公益性行业(农业)科研专项(3-20);福建省属公益类科研院所基本科研专项(2009R10028-3)

摘　　要：利用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增马铃薯晚疫病菌转录间隔区并进行序列测定,通过序列比较,设计了1对马铃薯晚疫病菌的特异引物INF1/INF2,并对15种不同真菌、细菌和7种疫霉属和腐霉属卵菌基因组DNA进行PCR扩增,结果只有不同来源的马铃薯晚疫病菌株可获得324 bp的特异带。将引物INF1/INF2与卵菌通用引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达30 fg。运用设计的引物与马铃薯青枯病菌特异引物结合建立了双重PCR体系,能从马铃薯晚疫病菌和马铃薯青枯病菌总基因组DNA以及人工接种和自然发病的马铃薯植株中分别或同时扩增到324 bp和281 bp的特异片段。实现了同时对马铃薯晚疫病菌和马铃薯青枯病菌的快速可靠检测。Based on the difference in internal transcribed spacer(ITS) sequences of Phytophthora infestans and other Phytophthora spp.,a specific pair of primers,INF1/INF2,was designed.Among 59 isolates representing seven Oomycetes and 15 other fungi and bacteria species,the primer pair amplified a single 324 bp product from all isolates of P.infestans but not from any other isolates tested.The detection sensitivity increased 1 000-fold to 30 fg genomic DNA by developed a nested PCR procedure with DC6/ITS4 as the firs...

关 键 词：晚疫病菌 青枯病菌 双重PCR 分子检测 

分 类 号：S435.32[农业科学—农业昆虫与害虫防治]