恙虫病东方体Karp株56kDa与47kDa外膜蛋白基因的嵌合和嵌合基因在大肠杆菌的表达  

Fusion of gene encoding 56-kDa protein with 47-kDa protein gene of Orientia tsutsugamushi Karp strain and expression of the fusion gene in E.coli

作　　者：余跃飞 [1] 温博海 [2] 温博贵 [3] 牛东升 [2] 陈梅玲 [2] 魏文进 [2] 邱玲 [2] 高宁 [2] 

机构地区：[1]军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071,汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所 [2]军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071 [3]汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所

出　　处：《中国人兽共患病学报》2004年第z1期76-77,共2页Chinese Journal of Zoonoses

摘　　要：目的将恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)Karp株的56kDa和47kDa外膜蛋白基因嵌合,并使嵌合基因在大肠杆菌细胞内表达,产生双抗原融合蛋白.方法采用PCR方法,从Ot Karp株基因组DNA中扩增56kDa蛋白基因片段,将该片段分别与原核表达载体pQE30及47kD蛋白基因重组质粒 pQE30/47连接,构建pQE30/56及pQE30/56-47重组质粒;用IPTG诱导转入大肠杆菌内的重组质粒的目的基因表达.结果SDS-PAGE显示,pQE30/56转化的大肠杆菌产生一约45kDa的融合蛋白和pQE30/56-47转化大肠杆菌产生一约90kDa融合蛋白(56-47融合蛋白),免疫印迹分析显示两融合蛋白均与Ot Karp株感染鼠血清产生特异性反应,56-47融合蛋白分别与47kDa、56kDa重组蛋白免疫的小鼠血清产生特异性反应,以及56-47融合蛋白免疫血清与56kDa和47kDa重组蛋白反应.结论Ot Karp 株的56kDa与47kDa外膜蛋白基因嵌合后在大肠杆菌细胞内实现了表达,表达的融合蛋白具有56kDa和47kDa外膜蛋白的抗原特性.

分 类 号：R5[医药卫生—内科学]