大鼠δ阿片受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达  

Construction of δ-pIRES2-EGFP plasmid and its expression in HEK293 cells

作　　者：胡子有[1] 漆松涛[2] 张遐[3] 曹琼[1] 吴炳义[1] 

机构地区：[1]南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广东广州510515 [2]南方医科大学南方医院神经外科,广东广州510515 [3]Institute of Mental Health ResearchUniversity of Ottawa

出　　处：《南方医科大学学报》2009年第7期1351-1353,共3页Journal of Southern Medical University

基　　金：国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金(30628018)

摘　　要：目的构建大鼠δ阿片受体基因的pIRES2-EGFP表达质粒,并实现其在HEK293细胞的表达。方法提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增δ受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切、连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-pIRES2-EGFP重组子转染入HEK293细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP和δ基因表达情况。结果酶切和测序结果表明δ基因正确构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,转染了重组子的HEK293细胞在荧光显微镜下可以观察到绿色荧光,应用细胞免疫荧光,可以观察到δ基因高强度表达。结论利用巢式RT-PCR等成功构建了δ-pIRES2-EGFP表达质粒,并在HEK293细胞中实现了高效表达。Objective To construct the δ-pIRES2-EGFP plasmid and investigate its expression in HEK293 cells.Methods Full length cDNA of rat δ opioid receptor gene amplified from rat brain tissues using reverse transcription and nested PCR was cloned into pMD20 T vector.The δ cDNA was inserted into pIRES2-EGFP plasmid to construct the recombinant eukaryotic plasmid δ-pIRES2-EGFP,which was transfected into HEK293 cells via Lipofectamine2000.The expression of δ was examined under fluorescence microscope.Results The recomb...

关 键 词：Δ阿片受体 巢式PCR PIRES2-EGFP HEK293 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]