凋亡素原核表达载体的构建、表达与抗体制备  

Construction of a prokaryotic expression vector for apoptin and preparation of polyclonal antibody of apoptin

作　　者：王健生[1] 张明鑫[1] 段小艺[2] 莫非[1] 王全颖[3] 杨广笑[3] 

机构地区：[1]西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061 [2]西安交通大学医学院第一附属医院核医学科,陕西西安710061 [3]西安华广生物工程公司,陕西西安710025

出　　处：《南方医科大学学报》2009年第7期1405-1407,共3页Journal of Southern Medical University

基　　金：2006年教育部博士点专项科研基金(20060698055)

摘　　要：目的构建凋亡素基因的原核表达载体,进行表达并制备表达蛋白的多克隆抗体。方法构建凋亡素pGEM-T/Apoptin载体,并将凋亡素基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。用表达蛋白常规免疫Balb/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果凋亡素基因被成功的克隆至pET-28a(+),表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子量约17000的位置出现目的蛋白条带,大小与预期结果一致,Balb/c小鼠经5次免疫后,得到了滴度为1:5×105血清抗体。结论凋亡素原核表达载体的成功构建和多克隆抗体的制备为进一步研究凋亡素的功能和凋亡素的应用研究奠定了基础。Objective To construct a prokaryotic expression vector for apoptin and prepare polyclonal antibody of apoptin.Methods Apoptin gene amplified from pGEM-T/Apoptin plasmid by PCR was cloned into pET-28a(+).E.coli BL21(DE3) was transformed by the recombinant plasmid,and apoptin protein expression induced by IPTG was analyzed by SDS-PAGE.BALB/c mice were immunized with the protein and the titer of the antibody was determined using indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results Apoptin gene was success...

关 键 词：凋亡素蛋白 原核表达 抗体制备 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]