解淀粉芽孢杆菌YN-1抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达  

Clonging of Antagonistic Protein TasA Gene in Bacillus amyloliquefaciens YN-1 and Its Prokaryotic Expression

作　　者：杨丽荣[1] 王正军[1,2] 薛保国[1] 刘红彦[1] 马建岗[2] 郑亚平[1] 

机构地区：[1]河南省农业科学院植物保护研究所,郑州450002 [2]西安交通大学生命科学院,西安710049

出　　处：《基因组学与应用生物学》2010年第5期823-828,共6页Genomics and Applied Biology

基　　金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08002-002B);河南省重大科技攻关项目(082101110400);河南省科技攻关项目(082102140011)共同资助

摘　　要：本文以解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株为研究对象,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出编码TasA抑菌基因的全长DNA,并构建pGEX-4T2/TasA原核表达载体,获得TasA-GST融合表达的抑菌蛋白。测序结果表明,解淀粉芽孢杆菌YN-1TasA基因核苷酸序列全长为786bp(GenBank登录号:EU131674),编码261个氨基酸残基;同源性分析表明,它与解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens FZB42(YP_001421886)序列的同源性最高,达98%,预测蛋白分子量为31kD。SDS-PAGE分析表明,TasA基因能在大肠杆菌BL21中表达,Western印迹分析pGEX-4T2/TasA原核表达载体,检测到约57kD的TasA-GST融合外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相符。表达产物细胞裂解液上清经Ni柱层析,表明浓度为500mmol/L咪唑洗脱缓冲液时获得较高浓度和纯度的纯化蛋白。进一步抑菌活性分析表明表达产物对黄瓜灰霉病病原菌检测平板上显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为今后深入研究TasA抑菌蛋白基因以及抗病转基因工程提供了参考。In this paper, we took Bacillus amyloliquefaciens YN-1 strain as the research object, amplified the full-length DNA encoding an antagonistic protein TasA from its genomic DNA by PCR, consrtucted the prokaryotic expression vector pGEX-4T2/TasA and also obtained the antagonistic protein of TasA-GST fused expression. The sequencing result showed that the full length nucleotides of TasA gene in Bacillus amyloliquefaciens YN-1 was 786 bp in size (GenBank accession number: EU131674) and encoded 261 amino acid res...

关 键 词：解淀粉芽孢杆菌 抑菌蛋白 基因克隆 原核表达 

分 类 号：S476[农业科学—农业昆虫与害虫防治]