苹果黑星病菌的分子检测  

Molecular detection of Venturia inaequalis

作　　者：商蓓[1] 付洁[1] 罗泽青[1] 胡小平[1] 杨家荣[1] 

机构地区：[1]西北农林科技大学植物保护学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2010年第8期104-110,共7页Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition)

基　　金：教育部长江学者和创新团队发展计划项目(200558);教育部"111"引智项目(B07049);欧盟科技合作项目(ICA4-CT-2001-10001)

摘　　要：【目的】建立苹果黑星病菌(Venturia inaequalis(Cooke)Wint)的分子检测方法,以提高检测精确度,缩短检测时间。【方法】根据苹果黑星病菌与其他苹果病原真菌核糖体基因转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列间的差异,设计了1对特异性引物320A/320B,用于苹果黑星病菌的分子检测,对特异性引物扩增条件进行了优化,并验证和检验了引物的特异性和灵敏度。【结果】特异性引物的扩增条带约为320bp,优化的反应体系为:2μL MgCl2(25mmol/L),2.5μL 10×buffer,3μL dNTP(2.5mmol/L),1.2 μL引物320A/320B(10μmol/L),0.5μL聚合酶(5U/μL),1μL模版DNA(30ng/μL),加ddH2O至总体积25μL;反应程序为:94℃3min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃延伸10min。利用该对特异性引物对包括苹果黑星病菌在内的26个苹果病原菌菌株基因组DNA进行的PCR扩增表明,只有苹果黑星病菌能扩增到1条约320bp的特异性条带,其他菌株及阴性对照的扩增产物均未检测到特异性条带。对接种苹果黑星病菌的苹果组织的检测表明,该对引物能特异性地检测到苹果黑星病菌的存在,其对苹果黑星病菌基因组DNA检测的灵敏度为100fp/μL。【结论】利用设计的特异性引物320A/320B,参考正交试验优化的体系和程序,结合简单的SDS法提取苹果黑星病菌基因组DNA,在1个工作日内即可完成对该病原菌的分子检测。【Objective】The molecular detection method was established to improve accuracy and shorten time of detection.【Method】According to the difference of internal transcribed spacer(ITS)between Venturia inaequalis(Cooke)Wint and fungi of other diseases for apple,a specific primer set(320A/320B) was designed for molecular detection of V.inaequalis.The genomic DNA of 26fungal strains,including V.inaequalis,were amplified by PCR using this primer set.The result showed that the primer set that allowed the amplificatio...

关 键 词：苹果黑星病菌 转录间隔区 特异性引物 正交优化 

分 类 号：S436.611[农业科学—农业昆虫与害虫防治]