基于Gateway技术的植物表达载体的构建  

Construction of a Gateway technology-based plant expression vector

作　　者：郭姗姗[1,2] 张蒙[2] 单卫星[2,3] 

机构地区：[1]西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100 [2]西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100 [3]陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2010年第11期161-166,172,共7页Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition)

基　　金：科技部"973"计划项目(2006CB101901);高等学校学科创新引智计划项目(B07049)

摘　　要：【目的】为方便基于植物瞬时表达技术的高通量功能基因筛选,利用Gateway技术实现植物表达载体和表达文库的构建,将35S启动子和Gateway技术入门载体pDONR222的同源重组区连接到植物表达载体pCAMBIA0380上,构建Gateway技术兼容的植物表达载体。【方法】分别扩增35S启动子与pDONR222上attP特异识别序列之间的功能区,并将其依次连入根癌农杆菌(Agrobacterium tume faciens)介导的植物表达载体pCAM-BIA0380的多克隆位点区,利用带有attB特异识别区域的GUS基因,对构建的载体功能进行测试。【结果】成功构建了基于Gateway技术的植物表达载体p1104D;载体重组基因的选择性测试结果表明,p1104D对目的基因片段的大小无严格选择性;载体重组效率测试结果表明,p1104D重组平均滴度为5.11×105cfu/mL;GUS报告基因瞬间表达试验结果表明,改造后的载体可以实现目标基因的顺利表达。【结论】基于Gateway技术的植物表达载体p1104D的构建,为实现cDNA文库的高效构建和目标基因的高通量功能筛选提供了可能,有望推动植物-病原互作研究中关键基因的鉴定与克隆。【Objective】To facilitate plant gene expression research and transient expression-based high throughput functional gene cloning in plants,the 35Spromoter sequence from pBi121 and the recombination specific sites attP-spanning region from pDONR222 were inserted into pCAMBIA0380 to make Gateway technology-compatible Agrobacterium tumefaciens-mediated plant expression vector.【Method】The 35Spromoter sequence and the attP-spanning region in the Gateway vector pDONR222 were amplified and inserted into the multiple...

关 键 词：GATEWAY技术 植物表达载体 瞬时表达 功能克隆 

分 类 号：Q943.2[生物学—植物学]