利用EST库资源克隆家蚕腺苷酸转移酶基因  

Cloning of Adenine Nucleotide Translocase Gene From Bombyx mori Based on EST Database

作　　者：陈大福[1,2] 牛宝龙[3] 翁宏飚[3] 孟智启[3] 吕顺霖[1] 

机构地区：[1]浙江大学动物科学学院,杭州310029 [2]福建农林大学蜂学学院 [3]浙江省农业科学院蚕桑研究所

出　　处：《蚕业科学》2004年第2期151-156,共6页ACTA SERICOLOGICA SINICA

基　　金：国家自然科学基金 (编号 3 0 3 710 87)

摘　　要：根据物种间同源基因相对保守的特点 ,利用生物信息学方法以果蝇 (Drosophilamelanogaster)腺苷酸转移酶基因 (adeninenucleotidetranslocase,ant)cDNA序列作为模板 ,对家蚕 (Bombyxmori)EST数据库进行同源检索筛选 ,克隆了家蚕腺苷酸转移酶基因的cDNA序列 (GenBank登录号为AY2 2 70 0 0 ) ,全长为 1936bp ,并经RT PCR克隆、序列分析验证 ,结果与电子克隆序列完全一致。该cDNA序列具有完整的开放阅读框架 (ORF ,2 0 7～ 110 9bp) ,推测编码蛋白为 30 0个氨基酸 ,通过与烟草天蛾 (Manducasexta)、蜜蜂 (Apismellifera)、绿蝇 (Luciliacuprina)、果蝇、蚊子(Anophelesgambiae)等昆虫的腺苷酸转移酶蛋白序列比较 ,发现该基因具有高度的保守性。表明根据物种间同源基因序列 ,对跨物种间EST数据库进行同源检索筛选、拼接 ,是基因克隆的一条有效途径。According to the relative conservation of homologous gene, a bioinformatics strategy is applied to clone a novel silkworm (Bombyx mori) adenine nucleotide translocase gene (ant) by blasting search of EST database with homologous gene cDNA of Drosophila melanogaster and identified. The full length silkworm ant cDNA of 1 963 bp encodes adenine nucleotide translocase (ANT) of 300 amino acids (aa), which is very conserved in Apis mellifera, Lucilia cuprina, D. melanogaster, Anopheles gambiae and Manduca sexta. The results revealed that it is a convenient technique for cloning novel gene by searching EST database with homologous gene of model living things such as the fruit fly.

关 键 词：家蚕 EST数据库 RT-PCR 腺苷酸转移酶 

分 类 号：S881.2[农业科学—特种经济动物饲养] Q78[农业科学—畜牧兽医]