双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金葡菌肠毒素B  

作　　者：李红云[1] 姚咏明[1] 施志国[1] 董宁[1] 于燕[1] 陆连荣[1] 盛志勇[1] 

机构地区：[1]解放军第304医院全军烧伤研究所基础部,北京100037

出　　处：《感染．炎症．修复》2002年第3期166-166,共1页Infection Inflammation Repair

摘　　要：目的:细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是革兰阳性菌(G^+菌)感染的重要标志之一,在 G^+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义。其中金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素和中毒性休克毒素-1(TSST-1)因其"超抗原"特性,以及它们在脓毒症和中毒性休克综合征中的特殊意义而倍受关注。本文建立了一种敏感、快速的酶免疫测定方法,用于定量检测动物体液及组织中金葡菌肠毒素 B(SEB)。方法:采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以 SEB 单抗1D_2为包被抗体、生物素标记的另一种 SEB 单抗2D_1为标记抗体进行测定。结果:在0.039～10.000μg/L 浓度范围内将 SEB 标准品进行倍比稀释,平行测定4次。当 SEB 标准品浓度为0.039μg/L 时,测得的平均 A 值仍明显高于阴性对照(分别为0.193和0.108)。若以样品 A 值/阴性对照 A 值大于2(P/N>2)作为阳性判断标准,则最低检出限为0.078μg/L(A=0.220)。在0.078～10.000μg/L 的浓度范围内,SEB 标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为 r=0.9906,平均变异系数为5.32%。为了考察方法的精确度,在标准曲线适用的范围内选择3个 SEB 浓度(10.000μg/L、5.000μg/L和2.500μg/L),每个浓度重复测定4次,变异系数分别为6.82%、5.25%、和3.90%,平均变异系数为5.32%。回收实验显示,正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为96.43%、97.34%和19.99%,正常人尿液中平均回收率为91.53%。上述结果表明该方法准确性较高,可用于定性及定量检测动物血浆及人尿液中的 SEB。结论:本法灵敏度高、准确性好、稳定性强,而且简便、快速,适用于动物血浆及组织中微量 SEB 的定量测定,并有一定的临床应用前景。

关 键 词：金葡菌 单抗 ELISA 肠毒素 

分 类 号：R44[医药卫生—诊断学]