Clostridium ljungdahlii乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶基因插入失活载体的构建  

作　　者：徐惠娟[1] Peter Dürre 粱翠谊 许敬亮[1] 袁振宏[1] 

机构地区：[1]中国科学院广州能源研究所可再生能源与天然气水合物重点实验室,广东广州510640 [2]Institute of Microbiology and Biotechnology Ulm University,ulmgermany89069

出　　处：《化工进展》2012年第S1期523-523,共1页Chemical Industry and Engineering Progress

基　　金：中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室基金(y107j4);中国香港王宽诚教育基金会访问学者项目

摘　　要：合成气/富CO废气发酵制乙醇是一项新的乙醇生产技术。该技术能以生物质、有机废物气化产生的合成气(主要成分CO,CO2和H2)或炼钢厂的废气为原料,利用特殊的微生物将其发酵为乙醇,因而在生物质、富CO废气及一些有毒或难降解的有机废物利用上将发挥重要作用。Clostridium ljungdahlii是最早发现也是研究得最多的合成气乙醇发酵菌株,其全基因组序列已报道。乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶是Clostridiumljungdahlii乙醇合成过程中催化乙酸/乙醛转化的一个重要的酶。本研究根据Clostridium ljungdahlii乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶基因序列设计了Ⅱ型内含子插入识别位点及相关引物,其最适插入位点为基因的有义链第360与361位核苷酸之间,之后采用重叠延伸PCR法扩增了内含子的IBS,EBS1d和EBS2序列,在质粒pMTL007的基础上构建了用于Clostridium ljungdahlii乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶基因插入失活的质粒pMTL007-Clj-aor-360s,经酶切和DNA测序验证,再转化含质粒pMCljS的大肠杆菌E.coli XL1-blue,利用氯霉素和奇霉素双抗性筛选获得了经甲基化修饰的目的质粒,可用于下一步电转化Clostridium ljungdahlii以构建Clostridiumljungdahlii乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶基因失活的基因工程菌。

关 键 词：乙醛铁氧还蛋白氧化还原酶基因 Ⅱ型内含子 合成气 乙醇 

分 类 号：TQ01[化学工程]