Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响  

Impact of Rab7 gene silencing on the production of NO/iNOS in LPS activated macrophages

作　　者：刘帅[1] 谢基明[2] 王玉珍[1] 宋亮[1] 王娜[1] 李云旭[1] 孙晓琳[1] 

机构地区：[1]内蒙古农业大学生命科学学院,呼和浩特010018 [2]内蒙古自治区医院检验科,呼和浩特010017

出　　处：《中国免疫学杂志》2011年第S1期1159-1162,共4页Chinese Journal of Immunology

基　　金：国家自然科学基金(30801001);内蒙古自然科学基金(2010MS0513)

摘　　要：目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P&lt;0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P&lt;0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P&lt;0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P&lt;0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。

关 键 词：脂多糖 Rab7 SIRNA 诱导型一氧化氮合成酶 一氧化氮 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]