miR-126慢病毒表达载体构建及其对脐静脉内皮细胞增殖的影响  

Construction of recombinant lentivirus vector expressing miR-126 and its effect on proliferation of human umbilical vein endothelial cells

作　　者：刘博[1] 邓伟峰[2] 吕慧[1] 

机构地区：[1]上海交通大学附属新华医院心内科,上海200092 [2]上海复旦大学附属妇产科医院,上海200000

出　　处：《解剖学杂志》2014年第3期304-308,共5页Chinese Journal of Anatomy

摘　　要：目的:构建miR-126的慢病毒表达载体,包装生产重组慢病毒,转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),研究高表达miR-126对HUVEC增殖的影响.方法:从293TN细胞中提取人基因组DNA为模板,PCR扩增miR-126前体序列并克隆至表达载体(pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP),构建miR-126的慢病毒表达载体.使用脂质体转染的方法将miR-126慢病毒表达载体以及慢病毒包装质粒混合物(LPPM)共转染293TN细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度.使用重组慢病毒Lv-miR-126和对照病毒(Lv-Control)感染HUVEC 72 h后通过Real Time-PCR和免疫印迹检测细胞内miR-126与血管内皮生长因子(VEGF-A)相对含量;MTT检测HUVEC增殖活性的变化.结果:成功调取miR-126前体序列并克隆至表达载体.成功进行了Lv-miR-126重组病毒的生产和滴度测定.Lv-miR-126感染HUVEC后,能够明显增强细胞内miR-126的相对含量,VEGF-A的表达水平则显著降低,蛋白含量下降约60％;同时明显抑制HUVEC的增殖活性,基因干预后48、72 h,细胞增殖活性均明显低于相同时间点对照病毒感染组,差异有统计学意义.结论:在HUVEC中过表达miR-126,可抑制VEGF-A表达,并且抑制内皮细胞增殖.

关 键 词：MIR-126 慢病毒表达载体 脐静脉内皮细胞 细胞增殖 血管内皮生长因子 

分 类 号：R37[医药卫生—病原生物学] S85[医药卫生—基础医学]