草原兔尾鼠卵透明带3基因原核表达条件的优化  

The Optimal Prokaryotic Expression of Lagurus lagurus ZP3 Fusion Protein

作　　者：张爱莲[1] 赵干[1] 王焱冰[1] 张富春[1] 

机构地区：[1]新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,新疆乌鲁木齐830046

出　　处：《生物技术》2004年第4期6-7,共2页Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (39960 0 4 7;30 360 0 62 ) ;中国科学院"西部之光"资助项目

摘　　要：目的 :通过大肠杆菌原核表达系统制备草原兔尾鼠卵透明带 3(LZP3)融合蛋白 ,作为草原兔尾鼠疫苗免疫抗生育研究的抗原物质。方法 :将LZP3基因的核心片段构建到融合表达载体pGEX - 4T - 1中GST的 3’端 ,形成GST -LZP3融合基因 ,经酶切鉴定和序列分析证实基因序列的正确性。在不同温度、不同时间和不同IPTG浓度进行诱导后 ,用SDS -PAGE检测融合蛋白的表达 ,发现有一条分子量约 6 3kD的新增蛋白条带。结果 :研究表明在 37℃、2 5℃的不同温度条件下均能诱导出LZP3蛋白 ,经SDS -PAGE和间接ELISA法检测 ,初步证明了LZP3基因能够在大肠杆菌中有效表达可溶性的融合蛋白。结论 :获得了LZP3融合蛋白表达的最佳诱导条件 ,为大量诱导产生LZP3融合蛋白奠定了理论基础。Objective:The zona pellucida 3 gene of Lagurus lagurus (LZP3) was expressed for the exploration of control method of wild mice population.Method:The core fragment encoding LZP3 gene was cloned into pGEX-4T-1 plasmid expressing glutathione s-transferase(GST) fusion protein.After identified by restriction enzyme digestion and sequencing,the recombinant clone was transferred into competent cells of E.coli BL21(DE3) and induced by IPTG under different temperature,different time,different IPTG.Finally,under 37℃ and 25℃,GST-LZP3 fusion protein was induced.Results:By SDS-PAGE and ELISA detection,the results showed GST-LZP3 fusion protein was effectively expressed in prokaryotic expression system.Conclusion:The expression optimal condition of LZP3 was successfully obtained.

关 键 词：草原兔尾鼠 卵透明带3 原核表达 融合蛋白 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]