应用抑制性消减杂交技术筛选rhALR调节基因  

作　　者：刘蔚[1] 成军[1] 张连峰[1] 纪冬[1] 刘妍[1] 郭江[1] 张黎颖[1] 

机构地区：[1]中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京市100039

出　　处：《世界华人消化杂志》2004年第10期2463-2466,共4页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：国家自然科学基金攻关项目;No.C03011402;No.C30070689军队九五科技攻关项目;No.98D063军队回国留学人员启动基金项目;No.98H038军队十五科技攻关青年基金项目;No.01Q138军队十五科技攻关面上项目;No.01MB135

摘　　要：目的:筛选与克隆重组人肝再生增强因子激活基因,了解其在体内的调节功能线索及机制.方法:应用大肠杆菌系统,表达、纯化重组人肝再生增强因子蛋白.刺激HepG2细胞,以溶剂PH7.8的磷酸盐缓冲液为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建重组人肝再生增强因子激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到30个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-1000bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得19种编码基因,包括15种已知基因和4种未知基因.结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、肿瘤免疫发生及物质代谢密切相关的蛋白编码基因,推测了重组人肝再生增强因子在体内可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.

关 键 词：抑制性消减杂交技术 筛选 rhALR 调节基因 大肠杆菌 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]