小鼠Lrp5基因启动子的克隆及功能分析  

Identification of Mouse Lrp5 Gene Promoter

作　　者：吕萍[1] 龚瑶琴[1] 李江夏[1] 周海斌[1] 陈丙玺[1] 

机构地区：[1]山东大学医学院医学遗传学研究所实验畸形学教育部重点实验室,济南250012

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》2005年第1期72-77,共6页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology

基　　金：教育部科学技术研究重点项目 (No .0 2 12 9)资助~~

摘　　要：为分析小鼠LDL受体相关蛋白 5 (Lrp5 )基因启动子的结构与功能 ,采用DNA重组技术 ,构建了 7种含小鼠Lrp5基因启动子荧光素酶报告基因表达体系 ,分别为 :pGL3 10 3(- 10 3bp～ + 132bp) ,pGL3 30 3(- 30 3bp～ + 132bp) ,pGL3 4 99(- 499bp～ + 132bp) ,pGL3 70 8(- 70 8bp～ + 132bp) ,pGL3 90 9(- 90 9bp～ + 132bp) ,pGL3 10 34(- 10 34bp～ + 132bp ) ,pGL3 12 2 9(- 12 2 9bp～ + 132bp) .以pRL TK为内参照质粒 ,瞬时转染成骨细胞株 (U2OS )及非成骨细胞株 (COS 7) ,收集细胞测定荧光素酶相对表达活性 .7种荧光素酶表达质粒在 2种细胞中表达无显著差异 ,即在所分析的小鼠Lrp5基因的 136 1bp(- 12 2 9bp～ + 132bp)范围内 ,不存在成骨细胞特异的表达元件 ;而且 7种表达质粒在 2种细胞中呈现相似的变化趋势 ,pGL3 10 3表达活性最高 ,pGL3 12 2 9表达活性显著降低 .表明小鼠Lrp5基因转录所必需的基本启动子序列在 - 10 3bp～ + 1bp范围内 ,- 10 34bp～ - 12 2 9bp之间的 195bp片段内可能含有负调控元件 .To analyze the structure and function of mouse LDL receptor related protein 5(Lrp5) gene promoter, seven luciferase expression vectors which contained mouse Lrp 5 gene promoter were constructed, including pGL3 103(-103 bp～+132 bp),pGL3 303(-303 bp～+132 bp),pGL3 499(-499 bp～ +132 bp),pGL3 708(-708 bp～+132 bp),pGL3 909(-909 bp～+132 bp),pGL3 1034(-1034 bp～ +132 bp), pGL3 1229(-1229 bp～+132 bp). All expression vectors were transfected into osteoblast cell line (U2OS) and non osteoblast cell line(COS 7). Relative luciferase activity in each cell lysate was measured. Seven luciferase expression vectors showed no significant differences and a similar trend in U2OS and COS 7 cells. The relative luciferase activity of pGL3 103 was the highest ,and the activity of pGL3 1229 was the lowest. The results suggest that there is no specific regulatory elements within the 1361 bp region (-1229 bp ～+132 bp). The region (-103 bp～+1 bp) includes an essential promoter for mouse Lrp 5 gene transcription. There is a negative control element between the -1034 bp and -1229 bp .

关 键 词：LDL受体相关蛋白5 小鼠 Lrp5基因 启动子 荧光素酶活性 

分 类 号：R394[医药卫生—医学遗传学] Q78[医药卫生—基础医学]