用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质  

作　　者：陈三凤[1] 管乐 涂然 孙文改 李季伦[1] 

机构地区：[1]农业生物技术国家重点实验室 [2]农业部农业微生物资源及其应用重点实验室,北京100094

出　　处：《科学通报》2005年第6期540-545,共6页Chinese Science Bulletin

基　　金：国家自然科学基金(批准号:30170020);博士点基金(批准号:20010019002)资助项目.

摘　　要：利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将nifA基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-nifA, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-nifA为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1～1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的fhuE基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.

关 键 词：相互作用 NIFA 酵母双杂交系统 蛋白质 筛选 巴西固氮螺菌 酵母双杂合系统 基因片段 染色体DNA NIFA 阳性克隆 DNA序列 同源性比较 基因克隆 质粒载体 质粒文库 NIFA 信号传递 移码突变 分析表 结构域 PAS E基因 特异性 

分 类 号：Q936[生物学—微生物学]