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作 者:林钊[1] 贾竹青[1] 马康涛[1] 陈苹[1] 周春燕[1]
机构地区:[1]北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系,北京100083
出 处:《中国生物化学与分子生物学报》2005年第2期262-266,共5页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology
基 金:国家 8 63重点项目基金 (2 0 0 1AA2 160 3 13;2 0 0 3AA2 0 5 0 90 ) ;北京市科委重大项目 (H0 2 0 2 2 0 0 10 490 ) ;教育部"2 11工程"重点学科建设项目;北京大学 985项目资助~~
摘 要:为了提高体外诱导ES细胞向心肌细胞分化的效率 ,对以往的诱导方法加以改进 ,采用直接悬浮培养和 0 8%DMSO诱导 ,建立了简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系 .诱导第 9d起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现 ,第 14d达到高峰 ,约有 70 %的拟胚体产生跳动 .用RT PCR的方法在跳动的拟胚体中检测到心肌细胞特异性标志物的表达 ,采用免疫荧光染色的方法在蛋白水平检测到心肌特异的α辅肌动蛋白 (α actinin)的表达 ,并可见清晰肌小节 ,表明在改进的体外诱导条件下ES细胞可分化为成熟的心肌细胞 .To improve the efficiency of inducing mouse embryonic stem cell (ES cell) differentiation into cardiomyocytes,an efficiet system combining suspension culture with 0.8% DMSO induction was developed.Under this condition,rhythmic beating embryoid bodies were observed on day 9 and peaked on day 14 reaching 70% of rhythmic beating embryoid bodies.RT-PCR results revealed that mRNA level of cardiac muscle specific gene troponin I was increased as the times cultured with DMSO.Using Immunofluorescent technique,the expression of a cardiac specific marker α-actinin was found in the differentiated cells.At the same time clear sarconeres structure was visible in these differentiated cells under microscope.These results indicate that the ES cells could be efficiently induced into cardiomyocytes in this system.
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