脱氧核酶抑制近日基因period1表达的实验研究  

作　　者：周薇[1] 王跃锜[1] 刘延友[1] 彭文珍[2] 肖静[1] 朱彬[1] 王正荣[1] 

机构地区：[1]四川大学华西基础与法医学院生物医学工程研究室,成都610041 [2]四川大学华西基础与法医学院生物化学与分子生物学教研室,成都610041

出　　处：《中国科学（C辑）》2005年第2期98-103,共6页Science in China(Series C)

基　　金：国家自然科学基金资助项目(批准号:3007027;39970275)

摘　　要：研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外切割反应,地高辛酶联免疫及酶催化显色法检测脱氧核酶的体外切割效率.将pcDNA3-per1和DRz164或DRz256在脂质体的介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测脱氧核酶对近日基因表达的影响.于37℃孵育2h后,DRz164对底物的剪切百分率为63%,DRz256为50.5%.RT-PCR半定量检测per1mRNA表达水平明显下降,FCM结果显示细胞内Per1蛋白的合成受到抑制.脱氧核酶DRz164,DRz256体外具有定点切割近日钟基因per1mRNA组分的活性,使转染细胞per1mRNA和Per1蛋白表达下降.

关 键 词：实验研究 酶抑制 NIH3T3细胞 脱氧核酶 聚合酶链反应 mRNA表达 RT-PCR 流式细胞术 半定量检测 设计合成 基因疗法 近日节律 体外转录 转录产物 切割反应 反应条件 切割效率 酶联免疫 基因表达 蛋白表达 转染细胞 钟基因 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]