消瘢方对体外CCl_4损伤大鼠原代肝细胞保护作用的研究  

作　　者：吴亚云[1] 程明亮[1] 李宏[1] 陆彤[1] 耿晓霞[1] 

机构地区：[1]贵阳医学院附属医院感染科,贵州省贵阳市550004

出　　处：《世界华人消化杂志》2005年第9期1139-1141,共3页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：贵州省自然科学基金资助项目;No.E-199

摘　　要：目的:探讨消瘢方抗肝纤维化作用的机理.方法:采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法,分离、培养大鼠肝细胞,先加入5%、10%、20%药物血清干预体外培养的肝细胞24h,再用四氯化碳(CCl4)蒸熏法制造肝细胞损伤模型.分别用MTT法及荧光实时定量RT-PCR法检测CCl4损伤后肝细胞的增殖、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达,并检测细胞培养上清中的谷草转氨酶(AST)活性.结果:消瘢方药物血清能显著地促进CCl4损伤后肝细胞的增殖(P<0.05,P<0.01).CCl4损伤模型肝细胞内有一定量的caspase-3mRNA表达(6.96±0.69ng),加5%、10%、20%正常大鼠血清干预后,肝细胞caspase-3mRNA的表达(6.31±0.64,6.01±0.68,5.54±0.58ng)稍低于CCl4损伤模型,加5%、10%、20%消瘢方药物血清干预后,肝细胞caspase-3mRNA的表达(5.51±0.72,4.87±0.45,3.08±0.82ng)显著下调(P<0.05,P<0.01).CCl4损伤模型肝细胞培养上清中AST活性为1203.91±86.85nkat,加5%、10%、20%正常大鼠血清干预后,其培养上清中AST活性降低为1092.39±57.01,1025.54±29.17,996.03±53.68nkat,加5%、10%、20%消瘢方药物血清干预后,其培养上清中AST活性(998.70±30.67,885.51±44.82,753.48±35.17nkat)显著降低(P<0.05,P<0.01).消瘢方药物血清对CCl4损伤后肝细胞增殖的影响、下调肝细胞caspase-3mRNA的表达及降低肝细胞培养上清中AST活性的作用,均呈明显的血清浓度依赖关系.结论:消瘢方抗肝纤维化机理与其保护肝细胞免受损害、抑制肝细胞凋亡有关.

关 键 词：CCl4损伤 消瘢方 细胞保护作用 CASPASE-3MRNA 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 mRNA表达 抗肝纤维化作用 药物血清 培养上清 密度梯度离心 PCR法检测 细胞损伤模型 0.05 大鼠血清 大鼠肝细胞 谷草转氨酶 肝细胞增殖 肝细胞凋亡 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学] R554.6[医药卫生—中医学]