E1A激活基因阻遏子在不同表型血管平滑肌细胞中的表达  

作　　者：刘海伟[1] 韩雅玲[1] 康建[1] 阎承慧[1] 王效增[1] 

机构地区：[1]沈阳军区总医院心血管内科,110016

出　　处：《沈阳部队医药》2005年第3期147-151,共5页

基　　金：国家自然科学基金(30070280)资助

摘　　要：为探讨血管平滑肌细胞表型转换、分化过程中E1A激活基因阻遏子(CREG)的表达变化及其相关机制,采用PCR扩增的CREG片段插入pGEX-4T-1原核表达载体,纯化的CREG融合蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体;以人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)为模型,[3H]标记脱氧胸苷掺入法测定去血清培养HITASY 细胞DNA合成变化;Western blot观察HITASY细胞在去血清培养过程中SM α-actin、calponin的表达,RT—PCR 和Western blot分析去血清培养诱导CREG mRNA和蛋白表达变化;免疫组化观察CREG在细胞内的表达及定位。结果成功地构建了载体并得到抗CREG多克隆抗体。去血清培养可使HITASY细胞DNA合成明显降低。随去血清培养时间延长,除SM α-actin和calponin表达逐渐上调之外,CREC mRNA转录活性和蛋白翻译合成亦上调。免疫组化显示去血清培养后,CREG蛋白在细胞内表达并主要位于细胞核周。结论:去血清能促使 HITASY细胞由合成表型向收缩表型转换,同时伴CREG mRNA和蛋白表达上调。

关 键 词：阻遏子 血管平滑肌细胞 表达 腺病毒E1A蛋白 多克隆抗体 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学]