神经红蛋白的表达、分离纯化和谱学表征  

作　　者：李连之[1] 冀海伟[1] 赵超[1] 许涛[1] 刘国富[2] 付崇罗[2] 闫华超[2] 

机构地区：[1]聊城大学化学化工学院,聊城252059 [2]聊城大学生命科学院,聊城252059

出　　处：《科学通报》2005年第10期964-969,共6页Chinese Science Bulletin

基　　金：国家自然科学基金(批准号:20471025);聊城大学科研基金资助项目.

摘　　要：报道了神经红蛋白(NGB)的基因表达、分离纯化和谱学表征.将载有NGB基因的pET3a质粒转入E.ColiBL21(DE3)plys细菌,于TB培养基中进行表达,其表达量占菌体总蛋白的10%左右.依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换柱,Hiload16/60Superdex75凝胶过滤柱和Hiprep16/10QFF阴离子交换柱纯化,得到了电泳纯的血红色可溶性蛋白.电喷雾质谱测得其分子量为16930.0Da.紫外-可见吸收光谱表明,还原态的NGB在425nm有一强吸收峰,在531和559nm处有弱吸收峰,它们可分别归属为金属卟啉的γ,β和α吸收带,氧化态的NGB在413nm处有强吸收,则对应于金属卟啉的γ吸收带,是电子在卟啉环中非定域化π电子的轨道跃迁(π→π?)的结果.荧光激发谱最大波长为281nm,发射谱最大波长为338nm.圆二色谱表明其二级结构为典型的α螺旋结构,在410nm处有一血红素正峰.酸稳定性研究表明,pH>4时蛋白稳定.

关 键 词：谱学表征 分离纯化 DEAE-Sepharose 神经 紫外-可见吸收光谱 阴离子交换柱 硫酸铵分级沉淀 E.Coli 金属卟啉 可溶性蛋白 电喷雾质谱 荧光激发谱 稳定性研究 基因表达 GB基因 凝胶过滤 轨道跃迁 螺旋结构 二级结构 圆二色谱 

分 类 号：Q819[生物学—生物工程]