通过叶绿体基因工程在烟草中合成中长链羟基脂肪酸聚酯  

作　　者：王玉华[1] 张秀海[2] 吴忠义[2] 杨清[1] 陈国强[3] 吴琼[3] 黄丛林[2] 

机构地区：[1]南京农业大学生命科学学院,南京210095 [2]北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100089 [3]清华大学生物科学与技术系,北京100084

出　　处：《科学通报》2005年第10期979-986,共8页Chinese Science Bulletin

基　　金：国家高技术研究发展计划资助项目(批准号:2002AA213051)

摘　　要：中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯.PHA合酶(PHAsynthase,由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acylcarrierprotein-coenzymeAtransferase,由phaG基因编码)是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶.以aadA(氨基糖苷-3′-磷酸转移酶)基因做筛选标记,分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体转化表达载体pTGC.通过PDS1000/He基因枪转化法转化烟草,获得具有壮观霉素抗性的叶绿体型转基因烟草植株,PCR和SouthernBlot结果表明,外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中且基本达到同质化.气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8mg/g干重,合成的PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate,3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate,3-HD).透射电子显微镜观察到转基因烟草叶片叶绿体中确有PHAs颗粒累积.

关 键 词：羟基脂肪酸 叶绿体基因工程 长链 Southern 转基因烟草植株 电子显微镜观察 叶绿体转化 生物合成途径 基因枪转化法 叶绿体基因组 基因编码 表达载体 PHAs 微生物聚酯 磷酸转移酶 气相色谱法 叶片叶绿体 筛选标记 氨基糖苷 

分 类 号：S572[农业科学—烟草工业]