分泌型TAT蛋白转导结构域基因通用真核表达载体的构建及表达  

作　　者：王锦之[1] 陈巨星[1] 杨忠[1] 周宇荀[1] 马昱澍[1] 魏东芝[1] 

机构地区：[1]华东理工大学生物反应器国家重点实验室,上海200237

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2005年第4期435-436,441,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：上海市重点学科基金资助项目(2002年度)

摘　　要：目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析。方法:依照编码TATPTD11肽及所引入的BamHI酶识别序列和增强性绿色荧光蛋白N端7个氨基酸的碱基序列合成了3条引物,以egfp基因为模板通过依次3轮PCR扩增得到tategfp融合基因,该基因片段以SfiI和HindⅢ双酶切后插入哺乳动物细胞表达载体pSectagA,构建成重组载体pSecTATmegfp,BamHI单酶切后该载体自连,即得到可通用的真核表达载体pSecTATm,重组质粒pSecTATmegfp转染HEK293细胞,融合蛋白的表达用Westernblot分析。结果:酶切及测序证实表达载体pSecTATm构建成功,Westernblot表明TATEGFP融合蛋白在HEK293细胞中获得表达并分泌到细胞培养液中。结论:成功地构建了分泌型TAT蛋白转导结构域基因的哺乳动物细胞融合表达载体,为更充分发挥TAT蛋白转导结构域在蛋白质功能及疾病治疗研究中的应用打下了基础。

关 键 词：TAT蛋白转导结构域 载体构建 增强性绿色荧光蛋白 WESTEM BLOT 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]