PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用  

Application of PCR Techniques in Detection of Simian Immunodeficiency Virus (SIV) in Monkey Infection Models

作　　者：丛喆[1] 涂新明[1] 蒋虹[1] 魏强[1] 佟巍[1] 孙敏[1] 于浩[1] 秦川[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院实验动物研究所中国协和医科大学实验动物学部,北京100021

出　　处：《中国实验动物学报》2005年第2期84-87,共4页Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica

基　　金：中国CIPRA项目;由美国NIH资助。

摘　　要：目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。[Objectives] (1) To develop a new RT-PCR method to assess the viral RNA in the plasma of SIV infected monkeys and to qualitatively compare the sensitivity of RT-PCR and traditional methods in detection of virus isolated from plasma. (2) To develop a DNA-PCR technique for measurement of proviral DNA load in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). (3) To verify the practicability and maneuverability of DNA-PCR and RNA-PCR techniques used in SAIDS monkey models. [Methods] Nine rhesus monkeys (Macaca mulatt...

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分 类 号：Q255[生物学—细胞生物学] S858.31[农业科学—临床兽医学]