应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-X蛋白反式激活基因  

作　　者：杨倩[1] 张黎颖[1] 成军[1] 洪源[1] 刘妍[1] 王琳[1] 董菁[1] 张树林[2] 

机构地区：[1]北京地坛医院传染病研究所,北京市100011 [2]西安交通大学第一医院传染科,陕西省西安市710061

出　　处：《世界华人消化杂志》2005年第13期1609-1611,共3页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：国家自然科学基金攻关项目;No.C03011402;No.C30070689军队九;五科技攻关项目;No.98D063军队回国留学人员启动基金项目;No.98H038军队十;五科技攻关青年基金项目;No.01Q138军队十;五科技攻关面上项目;No.01MB135

摘　　要：目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆前-X反式激活相关基因,了解该段基因的可能生物学功能. 方法:构建表达质粒pcDNA3.1(-)-前-X,转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;提取转染后细胞的mRNA,反转录为cDNA.cDNA经RsaI 酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库.文库扩增后得到45个白色克隆,进行茵落PCR 分析,均得到200-1000 bp插入片段.挑取含有插入片段的30个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得13种已知功能基因序列. 结论:应用SSH技术成功构建了前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为阐明该基因生物学功能提供理论依据.

关 键 词：抑制性消减杂交技术 反式激活基因 克隆 CDNA消减文库 乙型肝炎病毒(HBV) HepG2细胞 X蛋白 基因差异表达 反式激活相关基因 前-X基因 生物信息学分析 生物学功能 pcDNA3 多聚酶链反应 文库扩增 插入片段 同源性分析 PCR扩增 

分 类 号：R373.21[医药卫生—病原生物学] R392.11[医药卫生—基础医学]