固氮粪产碱菌nifH基因的亚克隆及其启动子的核苷酸序列分析  

Cloning of Structural Gene nifH of A. faecalis and Nucleotide Sequence Analysis of nifH Promoter

作　　者：张海予[1] 林敏[1] 方宣钧[1] 尤崇杓 朱玉贤[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院原子能利用研究所,北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室

出　　处：《农业生物技术学报》1995年第1期52-56,共5页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金：国家863项目资助课题

摘　　要：采用￣３２Ｐ标记的巴西固氮螺菌ＡｚｏｓｐｉｒｌｌｕｍｂｒａｓｉｌｅｎｓｅＳｐ７ｎｉｆＨＤＮＡ探针，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌ＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓＡ１５０１总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ同源的ＤＮＡ序列。在不同浓度下测定ｎｉｆＨ－ｌａｃＺ融合基因在粪产碱菌结合子中的β—半乳糖苷酶活性，结果证明该融令基因的表达受粪产碱菌基因调节系统的控制。构建了粪产碱菌总ＤＮＡＥｃｏＲＩ酶解的质粒文库。经两轮菌落筛选获得含ｎｉｆＨ同源序列的４．７ｋｂＥｃｏＲＩＤＮＡ片段的阳性克隆ｐＢＺ１。ｎｉｆＨ启动子区的核苷酸序列分析结果表明。A homologous sequence to nifH in A. faecalis had been identified by southern hybridizationwith a probe carrying the nifH gene from A. brasilense Sp7. nifH-lacZ fusion of A. brasilense Sp7 may ex-press in A. faecalis A1501 conjugatant,its expression was regulated by O_2 and A4 5 kb EcoRIfragment from A. faecalis,which hybridized with nifH probe,was cloned.The nucleotide sequence of 0.4kb subfragment of nifH promoter was established.

关 键 词：粪产碱菌 启动子 序列分析 基因 

分 类 号：S154.381[农业科学—土壤学] Q933[农业科学—农业基础科学]