应用抑制性消减杂交技术克隆HBV全S蛋白反式激活蛋白1的反式激活基因  

作　　者：白桂芹[1] 成军[1] 张树林[2] 刘妍[1] 刘蔚[1] 张黎颖[1] 

机构地区：[1]北京地坛医院传染病研究所,北京市100011 [2]西安交通大学第一医院传染科,陕西省西安市710061

出　　处：《世界华人消化杂志》2005年第15期1897-1900,共4页World Chinese Journal of Digestology

基　　金：国家自然科学基金资助;No.C03011402;No.C30070689军队九;五科技攻关项目;No.98D063军队回国留学人员启动基金项目;No.98H038军队十;五科技攻关青年基金项目;No.01Q138军队十;五科技攻关面上项目;No.01MB135

摘　　要：目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活蛋白1(CSTP1)的反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBVCSTP1反式激活相关基因.方法:以HBVCSTP1表达质粒pcDNA3.1(-)-CSTP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mKNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建入HBVCSTPl反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到86个白色克隆,进行菌落PCK分析,均得到100-1000bp插入片段.挑取25个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得23个已知基因序列和2个未知基因.未知基因的功能还正在研究中.结论:应用SSH技术成功构建了HBVCSTP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为进一步阐明HBVCSTP1反式调节的靶基因及致肝病发生的分子生物学机制提供理论依据.

关 键 词：抑制性消减杂交技术 反式激活基因 反式激活蛋白1 阳性克隆 S蛋白 CDNA消减文库 HBV 基因差异表达 反式激活相关基因 

分 类 号：R373.21[医药卫生—病原生物学] R446.61[医药卫生—基础医学]