利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎  

作　　者：张运海[1] 潘登科[1] 孙秀柱[1] 孙国杰[1] 王晓波[1] 刘晓辉[1] 李燕[1] 戴蕴平[1] 李宁[1] 

机构地区：[1]中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京100094

出　　处：《中国科学（C辑）》2005年第5期439-445,共7页Science in China(Series C)

基　　金：国家重点基础研究发展规划"973"项目(批准号:G20000161);北京市自然科学基金重大项目(批准号:5030001)资助

摘　　要：以转染了质粒pEGFP-N1的猪胎儿成纤维细胞与体外成熟(invitromaturation,IVM)的猪卵母细胞构建克隆胚,比较了细胞转染后G418筛选与否,卵母细胞IVM持续时间及IVM时氧分压高低对克隆胚早期发育的影响.结果如下:(ⅰ)G418连续筛选10天所得转GFP细胞的克隆胚卵裂率显著低于非筛选组(47.5%vs.71.6%,P<0.05),而囊胚率差异不显著(10%vs.10.4%,P>0.05);(ⅱ)相比于36hIVM,延长IVM时间至42h卵母细胞的核成熟明显改善(83.6%vs.96.7%,P<0.05);另外,虽然IVM42h也使得克隆胚卵裂率(59.3%vs.73.6%)及囊胚率(9.3%vs.13.2%)都略有提高,但效果不显著(P>0.05);(ⅲ)7%氧IVM42h的卵母细胞与20%氧处理组相比,克隆胚的卵裂率(70.6%vs.67.1%)以及囊胚率(11.8%vs.12.3%)差异都不明显(P>0.05).上述结果显示:(ⅰ)G418筛选对转绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆胚卵裂不利;(ⅱ)IVM36和42h的卵母细胞对克隆胚早期发育影响不明显,但IVM42h有利于核成熟,因此构建克隆胚时仍以IVM42h的卵母细胞为宜;(ⅲ)低氧对猪转GFP克隆胚早期发育无明显促进作用.

关 键 词：转基因克隆 绿色荧光蛋白 猪 早期发育 绿色荧光蛋白基因 猪卵母细胞 克隆胚胎 体细胞核移植技术 转基因 胎儿成纤维细胞 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程]