可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性  

作　　者：余冰[1] 倪明[2] 朱慧芬[1] 张悦[1] 杨静[1] 邵静芳[1] 沈关心[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北武汉430030 [2]华中科技大学同济医学院同济医院感染科,湖北武汉430030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2005年第6期714-716,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展规划(973)资助(No.2002CB513109)

摘　　要：目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化,用100g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv。将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后,观察其对细胞生长的影响。结果:经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10。经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达。Western blot分析证明,表达产物的相对分子质量(Mr)均为36000左右,与理论预期值相符。ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合,并抑制HepG2细胞的生长。结论:从人源噬菌体抗体库中,筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv,并在大肠杆菌中表达,有望用于肝癌生物治疗的实验研究。

关 键 词：噬菌体抗体库 单链抗体 金属离子螯和层析 生物淘洗 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]