HCC特异性结合的scFv-AP融合蛋白的构建与表达  

作　　者：程欣[1] 黄永建[2] 黄宇[1] 朱慧芬[1] 余冰[1] 唐珍洁 李文涵[1] 沈关心[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北武汉430030 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,湖北武汉430030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2005年第6期717-718,722,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展规划(973)资助(No.2002CB513109)

摘　　要：目的:构建与肝癌细胞特异性结合的单链抗体-AP融合蛋白,并诱导表达。方法:提取从大型人源噬菌体抗体库中筛选的含有与HCC特异性结合的scFv-10基因的质粒,用SfiI、NotI分别酶切,连接至经同样双酶切后的原核分泌型表达载体pDAP2上,转化和筛选后,阳性细菌经IPTG诱导表达,细胞ELISA鉴定融合蛋白活性。结果:重组质粒经PCR扩增,Eco91Ⅰ单酶切及Eco91Ⅰ/NotI双酶切鉴定,证明scFv-10基因已插入到原核分泌型表达载体pDAP2上。表达产物的定位分析表明融合蛋白主要分泌性表达到周质腔,细胞ELISA证明表达产物有与HCC结合的活性。结论:成功地构建并表达了与HCC特异性结合的单链抗体-AP融合蛋白,为其应用奠定了基础。

关 键 词：单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白 诱导表达 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]