GAP-43干扰RNA表达载体的构建与鉴定  

作　　者：胡建国[1] 富赛里[1] 李莹[1] 徐晓明[1] 陆佩华[1] 

机构地区：[1]上海第二医科大学神经生物学实验室

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2005年第6期771-772,774,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：上海市科技发展基金资助(No.00JC14021);国家重点基础研究发展规划(973)项目资助(No.2003CB515302)

摘　　要：目的:构建GAP-43小干扰RNA(SiRNA)的表达载体并在大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12中验证其抑制效果。方法:利用设计软件根据GAP-43mRNA序列设计特异性SiRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT H1.1/Neo。以LipofectamineTM2000试剂转染GAP-43-SiRNA表达载体至PC12细胞中,以NGF诱导PC12细胞GAP-43的表达,以免疫组化方法鉴定GAP-43-SiRNA对GAP-43表达的抑制效果。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pRNATH1.1/Neo的SiRNA插入序列完全正确,GAP-43-SiRNA表达载体转染PC12细胞后可特异性抑制NGF诱导的PC12细胞的GAP-43的表达。结论:GAP-43-SiRNA表达载体构建成功,为后期研究GAP-43在少突胶质细胞前体上表达的意义奠定了基础。

关 键 词：GAP-43 小干扰RNA 表达载体 PC12 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]