人血小板cDNA文库的建立  

ConstructionofhumanplateletcDNAlibrary

作　　者：王华梁[1,2] 龚兰生[1,2] 孔宪涛[1,2] 蔡伟箐 于金德[1,2] 戚文航[1,2] 吴春芳[1,2] 王海英[1,2] 赵函芳[1,2] 陈诗书[1,2] 程枫[1,2] 王亚新[1,2] 卢健[1,2] 

机构地区：[1]第二军医大学附属长征医院 [2]上海第二医科大学

出　　处：《中华血液学杂志》1996年第3期125-127,共3页Chinese Journal of Hematology

摘　　要：为建立人血小板ｃＤＮＡ文库，作者用人新鲜血小板悬液纯化血小板，加入变性液作匀浆，经苯酚、氯仿、异丙醇等抽提ＲＮＡ，以所得ＲＮＡ为模板合成ｃＤＮＡ，并将其连接λｇｔ１１臂，用噬菌体包装蛋白“包装”，再进行连续稀释，然后将不同稀释度的噬菌体转染宿主菌Ｙ１０９０。结果：从纯化血小板２．８×１０１２中获得约１．５ｍｇＲＮＡ，其Ａ（吸光度，曾称光密度ＯＤ）２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ为１．７２１，ＲＮＡ变性电泳可见１８ｓ和２８ｓ条带，且无ＲＮＡ降解。由该ＲＮＡ合成的第一条ｃＤＮＡ链产量为１．８２μｇ，第二条ｃＤＮＡ链产量为３．７９μｇ，放射自显影显示双链ｃＤＮＡ分子大小范围在０．５～５．０ｋｂ，大部分位于１．０～４．０ｋｂ之间。基因库效价为：总效价１．５２×１０８，重组子效价１．３８×１０８，重组百分比８３．１％；克隆效率６．９０×１０８。RNAsextractedfrompurifiedfreshhumanplateletswereusedastemplatestosynthesizecDNAs.ThecDNAswerelinkedtoλgt11,envelopedwithbacteriophageenvelopingprotein,anddilutedsuccessively.ThenthediferentlydilutedbacteriophageswereusedtotransfectbacteriaY1090.1.5mgRNAwasobtainedfrom2.8×1012purifiedplatelets.TheA260nm/A280nmwas1.721.RNAdenaturingelec-trophoresisshowedthe18sand28sbands.1.82μgofthefirst-strandand3.79μgofthesecond-strandcDNAsweresynthesized.Autoradiographyindicatedthatthemolecularsizesofthedouble-strandedcD-NArangedfrom0.5to5.0kb.Thetotalpotencywas1.52×108andthepotencyofrecombinantswas1.38×108.Thecloningeficencywas6.90×108.

关 键 词：血小板 CDNA 基因库 

分 类 号：Q522[生物学—生物化学] Q592